我們曾使用本室能得到的含最高濃度(約2mg／m1)HBsAg的血清樣本對目前國內(nèi)較大的試劑生產(chǎn)廠家的“一步法"HBsAg測定ELISA檢測試劑盒的“鉤狀效應(yīng)"進(jìn)行了評價(jià)，盡管大部分有在HBsAg最高濃度下的測定顯色較次高濃度(1：lo稀釋)顯色要淺的現(xiàn)象，但均未出現(xiàn)該份樣本測定為陰性的情況。盡管如此，在臨床實(shí)際工作中，仍有可能遇到“鉤狀效應(yīng)"較嚴(yán)重的HBsAg測定ELISA檢測試劑盒，我們也經(jīng)常聽到基層實(shí)驗(yàn)室同行在這方面的反映。

      而一步法雙抗夾心ELISA檢測試劑盒的反應(yīng)曲線則為鐘形曲線(圖2—3)。也就是說測定顯色隨著待則標(biāo)本中抗原濃度的增加而升高至一定程度后，測定吸光度即隨抗原濃度的增加而開始下降直至不顯色，即所謂的“鉤狀效應(yīng)"(hook eHect)，也就是我們在免疫沉淀試驗(yàn)中所稱的“帶現(xiàn)象"(zonephen。menon)。一步法的反應(yīng)平衡式如(3)式

       此外，b和c復(fù)合物的增加亦使得“雙抗體夾心復(fù)合物"難以形成。但如果 固相單抗和標(biāo)記單抗采用針對抗原的不同且空間距離較遠(yuǎn)的決定簇的抗體，即包被使用一種 單抗，酶標(biāo)記使用另一種單抗，同時(shí)充分混勻反應(yīng)液，并適當(dāng)延長反應(yīng)溫育時(shí)間，則可使b，。和 d復(fù)合物減少至程度，而大大減輕“鉤狀效應(yīng)"。

       綜上所述，一步法ELISA檢測試劑盒作為迎合臨床實(shí)驗(yàn)室簡便快速要求的產(chǎn)物，有著巨大的市場，其雖有潛在缺陷，易導(dǎo)致含高濃度待測物的標(biāo)本檢測為陰性(假陰性)，但精心的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，對包被和酶標(biāo)記抗體仔細(xì)選擇，“鉤狀效應(yīng)"出現(xiàn)的可能性降至。此外，建議生產(chǎn)HBsAg，aFP和hCGELISA"一步法"測定ELISA檢測試劑盒的廠家，應(yīng)對所產(chǎn)的試劑在出廠前對其“鉤狀效應(yīng)"(hookeffect)進(jìn)行充分的研究，并提醒用戶在使用時(shí)應(yīng)注意之處。

       因此，大家還應(yīng)該重視這方面的問題·，當(dāng)發(fā)現(xiàn)測定結(jié)果明顯與臨床不符或與相關(guān)測定指標(biāo)互有矛盾，如HBeAg陽性樣本HBsAg測定為陰性時(shí)，就應(yīng)考慮HBsAg測定可能存在的“鉤狀效應(yīng)"問題。在通常的兩步溫育洗滌方法中，抗原抗體反應(yīng)將遵循下述規(guī)律，即在第一步中加入的待測標(biāo)本中抗原(Ag)濃度逐步增加時(shí)，將使固相抗體(Ab)與抗原的結(jié)合逐步達(dá)到飽和[(1)式]，這樣當(dāng)隨后加入一定濃度的酶標(biāo)抗體(Ab’)后，a復(fù)合物的形成將直接與在第一步中形成的b復(fù)合物相關(guān)[(2)式]，因此，待測抗原濃度的逐步增加導(dǎo)致了顯色的逐步加深，當(dāng)抗原濃度增加到一定程度時(shí)，反應(yīng)顯色達(dá)到平臺，而呈S形變化曲線。